fa طراحی، مهندسی و بیان ژن رمزگذار پپتید ضد قارچی FeAP در گیاه مدل توتون با هدف توسعه استراتژی نوین در کنترل قارچ Ascochyta rabiei تخصصي Special پژوهشي Research <h6 dir="RTL" style="text-align:justify; margin-bottom:8px"><span style="font-size:10pt"><span style="direction:rtl"><span style="unicode-bidi:embed"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><span style="font-weight:normal"><span lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span b="" nazanin="" style="font-family:">امروزه پپتیدهای ضد قارچی یکی از استراتژی</span></span><span lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span b="" nazanin="" style="font-family:">‌ها</span></span><span lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span b="" nazanin="" style="font-family:">ی موثر در مقابله با قارچ</span></span><span lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span b="" nazanin="" style="font-family:">‌ها</span></span><span lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span b="" nazanin="" style="font-family:">ی بیماریزا مانند </span></span><i>Ascochyta rabiei</i><i> </i><span lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span b="" nazanin="" style="font-family:">هستند. از این‌رو، این مطالعه با هدف بررسی ظرفیت پپتید ضد قارچی </span></span>FeAP<span lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span b="" nazanin="" style="font-family:"> بر قارچ </span></span><i>A. rabiei</i><span lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span b="" nazanin="" style="font-family:"> صورت پذیرفت. بدین منظور،&nbsp; پس از طراحی سازه بیانی و انجام آنالیزهای دینامیک مولکولی به منظور بررسی پایداری پپتید ضد قارچی، ژن هدف سنتز و به ناقل بیانی </span></span>pCAMBIA3301<span lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span b="" nazanin="" style="font-family:"> وارد گردید. سازه به اگروباکتریوم انتقال یافت و سپس گیاه توتون با این باکتری آلوده شد. تایید انتقال ژن به&nbsp; توتون با استفاه از ژن گزارشگر </span></span>GUS<span lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span b="" nazanin="" style="font-family:"> و روش </span></span>RT-PCR<span lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span b="" nazanin="" style="font-family:"> انجام شد. پس از استخراج و خالص سازی پپتید </span></span>FeAP<span lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span b="" nazanin="" style="font-family:">&nbsp; با ستون نیکل از گیاه تراریخته، عملکرد آن با استفاده از روش انتشار چاهک بر روی قارچ </span></span><i>A. rabiei</i><span lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span b="" nazanin="" style="font-family:"> مورد بررسی قرار گرفت. نتایج نشان داد که سازه طراحی شده برای تولید پپتید ضد قارچی امکان تولید پپتید پایدار را فراهم ساخته است. تایید تولید پپتید ضد قارچی با وزن مولکلولی حدودی 11 کیلودالتون روی ژل </span></span>SDS-PAGE<span lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span b="" nazanin="" style="font-family:"> صورت گرفت. ایجاد هاله 14 میلی</span></span><span lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span b="" nazanin="" style="font-family:">‌</span></span><span lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span b="" nazanin="" style="font-family:">متری در ممانعت رشد از قارچ در غلظت 320 میلی</span></span><span lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span b="" nazanin="" style="font-family:">‌</span></span><span lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span b="" nazanin="" style="font-family:">گرم بر میلی</span></span><span lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span b="" nazanin="" style="font-family:">‌</span></span><span lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span b="" nazanin="" style="font-family:">لیتر نشان از ظرفیت بالای پپتید ضد میکروبی تولید شده برای انتقال به گیاه نخود و ایجاد گیاهی مقاوم نسبت به این قارچ است.</span></span></span></span></span></span></span></h6> <span style="font-size:12pt"><span style="background:white"><span style="line-height:normal"><span style="unicode-bidi:embed"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><span style="font-size:10.0pt"><span style="color:black">Antifungal peptides are among the effective strategies for combating pathogenic fungi such as <i>Ascochyta rabiei</i>. This study was conducted to investigate the antifungal activity of the FeAP peptide against <i>A. rabiei</i>. Therefore, an expression construct was designed and molecular dynamics analyses were performed to evaluate the stability of the antifungal peptide. The target gene was synthesized and inserted into the pCAMBIA3301expression vector. The construct was transformed into <i>Agrobacterium</i> and then tobacco plants were infected with this bacterium. Successful transformation of tobacco plants was confirmed using the GUS reporter gene and RT-PCR analysis. The FeAP peptide purified using a Ni-NTA affinity column, and its antifungal activity was evaluated using the well diffusion method against <i>A. rabiei</i>. The results of the molecular dynamics analyses indicated that the designed construct enabled the production of a stable peptide. Production of the antifungal peptide, with an approximate molecular weight of 11 kDa, was confirmed by SDS-PAGE. A clear zone with a diameter of 14 mm demonstrated inhibition of <i>A. rabiei</i> growth at a concentration of 320 mg/ml. Furthermore, the findings of this study may contribute to the development of chickpea plants resistant to <i>A. rabiei</i>.</span></span><span style="font-size:10.0pt"></span></span></span></span></span></span><br> &nbsp; آگروباکتریوم, انتقال ژن, پپتید ضد قارچی, دینامیک مولکولی Agrobacterium, Gene delivery, Antifungal peptide, Molecular dynamics 1 14 http://journalofbiosafety.ir/browse.php?a_code=A-10-921-1&slc_lang=fa&sid=1 Sahba Toosi صهبا طوسی toosi.sahba@alumni.um.ac.ir 10031947532846004454 10031947532846004454 No گروه بیوتکنولوژی و به نژادی گیاهی ، دانشکده کشاورزی، دانشگاه فردوسی مشهد Saeid Malekzadeh Shafaroudi سعید ملک زاده شفارودی malekzadeh-s@um.ac.ir 10031947532846004455 10031947532846004455 Yes گروه بیوتکنولوژی و به نژادی گیاهی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه فردوسی مشهد Farhad shokouhifar فرهاد شکوهی فر shokouhifar@um.ac.ir 10031947532846004456 10031947532846004456 No گروه گیاهپزشکی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه فردوسی مشهد Mojtaba Mamarabadi مجتبی ممرآباذی mamarabadi@um.ac.ir 10031947532846004457 10031947532846004457 No گروه گیاهپزشکی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه فردوسی مشهد Nasrin moshtaghi نسرین مشتاقی moshtaghi@um.ac.ir 10031947532846004458 10031947532846004458 No گروه بیوتکنولوژی و به نژادی گیاهی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه فردوسی مشهد